人诱导多能干细胞/hiPSC-北京赛贝生物技术有限公司

人诱导多能干细胞/hiPSC

赛贝生物（Cellapy^®）提供的人诱导多能干细胞（hiPSC）是由人体细胞通过非整合的方法诱导获得。hiPSC在无饲养层、化学成分明确、并且无动物源成分的PSCeasy^®人多潜能干细胞培养体系中培养，适合临床级的干细胞研究和应用。hiPSC在PSCeasy^®人多潜能干细胞培养体系中可以长期稳定快速增殖，具有高度近似人ES细胞的克隆形态和基因表达，长期维持正常核型，并在体内外具有三胚层分化潜能。

产品介绍
疑难解答

细胞信息：

项目	内容
名称	hiPSC-人诱导多能干细胞
来源	37岁男性尿液肾上皮细胞
诱导方式	仙台
规格	1×10⁶

货号：CA4002106/CA4024106/CA4025106

规格：1×10⁶

储存条件：液氮储存

产品简介：

赛贝生物（Cellapy^®）提供的人诱导多能干细胞（hiPSC）是由人体细胞通过非整合的方法诱导获得。hiPSC在无饲养层、化学成分明确、并且无动物源成分的PSCeasy^®人多潜能干细胞培养体系中培养，适合临床级的干细胞研究和应用。hiPSC在PSCeasy^®人多潜能干细胞培养体系中可以长期稳定快速增殖，具有高度近似hESC的克隆形态和基因表达，长期维持正常核型，并在体内外具有三胚层分化潜能。

产品内容：

组分代码	名称	规格	数量
CA4002106/CA4024106/CA4025106	人诱导多能干细胞（hiPSC）	1×10⁶	2支
CA1002008	PSCeasy^®人多潜能干细胞复苏完全培养基	10mL	2瓶

生长曲线检测结果：细胞增殖良好，倍增时间为24小时，为快速增长型细胞。

注：细胞在一次传代内的生长曲线与倍增曲线。A：细胞培养4天的生长曲线。纵轴：细胞数，横轴：培养时间。B：细胞培养4天的倍增曲线。纵轴：细胞倍增次数，横轴：培养天数。

真菌和细菌污染检测：无真菌或细菌的污染

支原体污染检测：无支原体污染

细胞复苏后培养24小时，光学显微镜下观察，无真菌或细菌的污染

吸取上清液，培养Vero细胞，通过DNA染色法检测，仅观察到细胞的DNA，并无支原体DNA的存在。Scale bars,100μm。

免疫荧光染色检测：

细胞核型检测：

细胞核型检测--- 46，XY（G带），核型正常

畸胎瘤检测：

图B：倍增曲线

图A：生产曲线

细胞复苏率低是什么原因？

细胞复苏需使用PSCeasy^®解冻液，可大大提高细胞的复苏效率。复苏过程中，转移细胞、吹打混匀和重悬细胞时，吹打力度要轻柔，并尽量减少吹打次数，细胞接种后，即刻在镜下观察细胞团块的大小，4 ~ 10个细胞的团块为最佳。如果吹打力度过大或次数过多，导致细胞分散成单细胞，细胞复苏率将偏低。

培养基中有沉淀状物质是否是质量问题？

添加剂在解冻过程中，会有少量沉淀析出，属于正常现象，不影响使用，请充分混匀后与基础培养基混合。但添加剂不能在37℃解冻，否则会析出大量沉淀，影响培养基的效价。如果培养基中出现大量沉淀，请不要使用。

是否能在37℃预热PSCeasy^®完全培养基？

不推荐。频繁地在4℃和37℃之间转换会导致PSCeasy^®完全培养基中含有的因子失活，PSCeasy完全培养基在使用前放置至室温即可。  是否能用dispase酶或者胶原酶进传代？在PSCeasy^®培养体系中培养的人iPSC需用非酶的温和消化方式传代，用dispase酶或者胶原酶消化细胞会对细胞造成伤害，影响传代后细胞的存活率和贴壁率。

细胞消化后成了单细胞是什么原因？

人iPSC消化成小克隆（4个以上20个以下的细胞聚集）进行传代最为适宜，消化为单细胞会短暂影响细胞的状态。造成细胞消化成单细胞的原因有1）0.5mM EDTA传代工作液消化过度，需减短消化时间。2）对细胞悬液吹吸的力度过重，或次数过多，需缓慢吸液与吹液，每皿/瓶的吹吸次数控制在10次以下。

人iPSC在传代后不贴壁怎么解决？

造成人ESC传代后不贴壁的最可能的原因：1) 细胞消化时间不合适，或消化后吹打次数不合适，使得完成传代后细胞集落过大或过小。2) Matrix包被的操作失误，请严格按照Matrix的操作说明书分装与包被Matrix。  人iPSC分化怎么处理？ 1)细胞在刚复苏或传代时，小的细胞团不呈现标准的克隆形态，培养几天或传代后可恢复。2）如果人iPSC分化的表现为干细胞克隆形态良好，克隆周边出现散在的分化细胞，可通过高比例传代（≥1:10），使得分化细胞的密度减少，低密度的分化细胞可被PSCeasy^®培养体系筛选去除，如未完全去除，可用细胞刮或巴斯德管刮除。3）如果人iPSC分化的表现为克隆内部松散，边缘不平滑，在分化比例小或分化不严重的情况下，可通过连续传代2 ~ 3次恢复，如果分化严重，建议弃除。