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人诱导多能干细胞/hiPSC
赛贝生物(Cellapy®)提供的人诱导多能干细胞(hiPSC)是由人体细胞通过非整合的方法诱导获得。hiPSC在无饲养层、化学成分明确、并且无动物源成分的PSCeasy®人多潜能干细胞培养体系中培养,适合临床级的干细胞研究和应用。hiPSC在PSCeasy®人多潜能干细胞培养体系中可以长期稳定快速增殖,具有高度近似人ES细胞的克隆形态和基因表达,长期维持正常核型,并在体内外具有三胚层分化潜能。
- 产品介绍
- 疑难解答
细胞信息:
项目 | 内容 |
名称 | hiPSC-人诱导多能干细胞 |
来源 | 37岁男性尿液肾上皮细胞 |
诱导方式 | 仙台 |
规格 | 1×106 |
货号:CA4002106/CA4024106/CA4025106
规格:1×106
储存条件:液氮储存
产品简介:
赛贝生物(Cellapy®)提供的人诱导多能干细胞(hiPSC)是由人体细胞通过非整合的方法诱导获得。hiPSC在无饲养层、化学成分明确、并且无动物源成分的PSCeasy®人多潜能干细胞培养体系中培养,适合临床级的干细胞研究和应用。hiPSC在PSCeasy®人多潜能干细胞培养体系中可以长期稳定快速增殖,具有高度近似hESC的克隆形态和基因表达,长期维持正常核型,并在体内外具有三胚层分化潜能。
产品内容:
组分代码 | 名称 | 规格 | 数量 |
CA4002106/CA4024106/CA4025106 | 人诱导多能干细胞(hiPSC) | 1×106 | 2支 |
CA1002008 | PSCeasy®人多潜能干细胞复苏完全培养基 | 10mL | 2瓶 |
生长曲线检测结果:细胞增殖良好,倍增时间为24小时,为快速增长型细胞。
注:细胞在一次传代内的生长曲线与倍增曲线。A:细胞培养4天的生长曲线。纵轴:细胞数,横轴:培养时间。B:细胞培养4天的倍增曲线。纵轴:细胞倍增次数,横轴:培养天数。
真菌和细菌污染检测:无真菌或细菌的污染
支原体污染检测:无支原体污染
细胞复苏后培养24小时,光学显微镜下观察,无真菌或细菌的污染
吸取上清液,培养Vero细胞,通过DNA染色法检测,仅观察到细胞的DNA,并无支原体DNA的存在。Scale bars,100μm。
免疫荧光染色检测:
细胞核型检测:
细胞核型检测--- 46,XY(G带),核型正常
畸胎瘤检测:
图B:倍增曲线
图A:生产曲线
细胞复苏率低是什么原因?
细胞复苏需使用PSCeasy®解冻液,可大大提高细胞的复苏效率。复苏过程中,转移细胞、吹打混匀和重悬细胞时,吹打力度要轻柔,并尽量减少吹打次数,细胞接种后,即刻在镜下观察细胞团块的 大小,4 ~ 10个细胞的团块为最佳。如果吹打力度过大或次数过多,导致细胞分散成单细胞,细胞 复苏率将偏低。
培养基中有沉淀状物质是否是质量问题?
添加剂在解冻过程中,会有少量沉淀析出,属于正常现象,不影响使用,请充分混匀后与基础培养基混合。但添加剂不能在37℃解冻,否则会析出大量沉淀,影响培养基的效价。如果培养基中出现 大量沉淀,请不要使用。
是否能在37℃预热PSCeasy®完全培养基?
不推荐。频繁地在4℃和37℃之间转换会导致PSCeasy®完全培养基中含有的因子失活,PSCeasy完全 培养基在使用前放置至室温即可。 是否能用dispase酶或者胶原酶进传代? 在PSCeasy®培养体系中培养的人iPSC需用非酶的温和消化方式传代,用dispase酶或者胶原酶消化细 胞会对细胞造成伤害,影响传代后细胞的存活率和贴壁率。
细胞消化后成了单细胞是什么原因?
人iPSC消化成小克隆(4个以上20个以下的细胞聚集)进行传代最为适宜,消化为单细胞会短暂影 响细胞的状态。造成细胞消化成单细胞的原因有1)0.5mM EDTA传代工作液消化过度,需减短消 化时间。2)对细胞悬液吹吸的力度过重,或次数过多,需缓慢吸液与吹液,每皿/瓶的吹吸次数控 制在10次以下。
人iPSC在传代后不贴壁怎么解决?
造成人ESC传代后不贴壁的最可能的原因:1) 细胞消化时间不合适,或消化后吹打次数不合适, 使得完成传代后细胞集落过大或过小。2) Matrix包被的操作失误,请严格按照Matrix的操作说明书 分装与包被Matrix。 人iPSC分化怎么处理? 1)细胞在刚复苏或传代时,小的细胞团不呈现标准的克隆形态,培养几天或传代后可恢复。2)如 果人iPSC分化的表现为干细胞克隆 形态良好,克隆周边出现散在的分化细胞,可通过高比例传代 (≥1:10),使得分化细胞的密度减少,低密度的分化细胞可被PSCeasy®培养体系筛选去除,如未完 全去除,可用细胞刮或巴斯德管刮除。3)如果人iPSC分化的表现为克隆内部松散,边缘不平滑, 在分化比例小或分化不严重的情况下,可通过连续传代2 ~ 3次恢复,如果分化严重,建议弃除。
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