心肌细胞纯化前形态图

心肌细胞纯化后第3天

心肌细胞纯化后第5天

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Accutase传代工作液传代心肌细胞时，何种程度才算是消化合适？超过推荐时间（30分钟）会对心 肌细胞造成损伤吗？ 

加入Accutase传代工作液后，显微镜下观察细胞脱离皿底，观察细胞呈“圆形”，即可终止消化。 消化终止时细胞不需要呈单细胞，而是通过吹打将细胞制成单细胞悬液。可根据具体情况适当延长/ 缩短消化时间，1小时之内，不会对心肌细胞造成过大损伤。 

心肌细胞纯化达不到所需的纯度。 

1）心肌细胞密度过大影响会纯化效果，可以以适当比例再接种后，用CardioEasy心肌维持培养基培 养，待心肌细胞恢复正常搏动，再用CardioEasy心肌纯化完全培养基进行纯化；

2）延长纯化时间， 只要心肌细胞状态良好，正常搏动，可以在CardioEasy心肌纯化完全培养基中持续纯化；

3）多次纯 化，对单次纯化无法达到理想纯度的心肌细胞，可以在终止纯化后，用CardioEasy心肌维持培养基 维持培养4天以上，待心肌细胞恢复正常搏动，再次用CardioEasy心肌纯化完全培养基进行纯化。  

心肌细胞停止搏动或搏动缓慢 

1）心肌细胞在再接种操作后，需要1-3天才能恢复搏动；

2）心肌细胞在换液操作后、或在培养箱外 放置过久，会减缓搏动或停止搏动，需要1-3小时才能恢复正常搏动； 

3）心肌细胞长时间在CardioEasy 心肌纯化完全培养基中培养，搏动会减缓，需及时停止纯化，在CardioEasy心肌维持培养基中恢复4 天以上，才能再次纯化。