1、室温平衡 CardioEasy® 心肌接种培养基、PBS 溶液和 CardioEasy® 人心肌细胞消化液，取出包被过 Matrix的培养皿/瓶，吸去包被液并加入适量 CardioEasy® 心肌接种培养基，置于 5% CO₂ 的 37℃恒温细胞培养箱中。

2.吸走 CardioEasy® 心肌维持培养基，并且加入 PBS 溶液洗一次。

3.加入 CardioEasy® 人心肌细胞消化液使之完全覆盖皿/瓶底。

4.37℃孵育 15 ~ 30 min，显微镜下观察到大部分细胞相互分离，表面细胞消化时间理想。

5.用移液器扇形吹打培养皿/瓶底，使皿/瓶底贴附的心肌细胞脱落，将细胞转移至 15mL 离心管中，再向皿/瓶中加入适量 PBS 溶液清洗皿/瓶底，收集剩余细胞加入 15mL 离心管。

注：吹打力度要轻柔，避免损伤心肌细胞

6.200g 离心 5 min。

7.弃去上清，用 CardioEasy® 心肌接种培养基重悬细胞，轻柔吹打混匀，并接种到准备好的培养皿/瓶中，水平十字振动使细胞均匀分布。

8.5% CO2 的 37℃恒温培养箱中培养 48h，更换为 CardioEasy® 心肌维持培养基，维持培养。