无饲养层细胞培养条件下，以PSCeasy®Ⅱ培养基进行扩增的hiPSC呈克隆集落样生长。

PSCeasy®Ⅱ培养基增殖曲线

以PSCeasy®Ⅱ培养基对多潜能干细胞进行长期培养（10次传代）后，采集到的多能性标记物染色结果。

经过以PSCeasy®Ⅱ培养基长期传代培养的hES细胞和hiPS细胞的基因表达谱聚类在一起，而与成纤维细胞（hFibroblast）差异较大（A）。同时，散点分布图数据的比较，也可以得出相同的结论（B，C）。

hiPSC和hESC在PSCeasy®Ⅱ培养基中连续培养十代后仍保持正常的核型

将hiPSC移植到免疫缺陷小鼠的肾包膜中，经过4-6周后可以形成具有不同胚层组织的畸胎瘤

经过PSCeasy®Ⅱ培养基长期传代培养的hiPSC维持了其在体外分化为三个胚层细胞的潜能。

是否还需要往PSCeasyⅡ培养基中补充或添加成分？ 

不需要。PSCeasyⅡ培养基中各个成分的质量和浓度都经过了最优化实验，完全支持人ESC/iPSC的长 期培养，您无需再自行添加。

培养基中有沉淀状物质是否是质量问题？

添加剂在解冻过程中，若有少量沉淀析出，属于正常现象，不影响使用，请充分混匀后与基础培养 基混合。但添加剂不能在37℃解冻，否则会析出大量沉淀，影响培养基的效价。如果培养基中出现 大量沉淀，请不要使用。

是否能在37℃预热PSCeasyⅡ完全培养基？

不能。频繁地在4℃和37℃之间转换会导致PSCeasyⅡ完全培养基中含有的因子失活，PSCeasyⅡ完全培 养基在使用前平衡至室温即可。

人ESC/iPSC在传代后不贴壁怎么解决？

造成人ESC/iPSC传代后不贴壁可能的原因：

1) 细胞消化时间不合适，或消化后吹打次数不合 适，使得完成传代后细胞集落过大或过小。

2) Matrix包被操作失误，请严格按照Matrix的操作说明 书分装与包被。

人ESC/iPSC分化怎么处理？

1）细胞在刚复苏或传代时，小的细胞团不呈现标准的克隆形态，培养几天或传代后可恢复。

2）如果人ESC/iPSC分化的表现为干细胞克隆形态良好，克隆周边出现散在的分化细胞，可通过高比例 传代（≥1:10），使得分化细胞的密度减少，低密度的分化细胞可被PSCeasy培养体系筛选去除，如 未完全去除，可用细胞刮或巴斯德管刮除。

3）如果人ESC/iPSC分化的表现为克隆内部松散，边缘 不平滑，在分化比例小或分化不严重的情况下，可通过连续传代2 ~ 3次恢复，如果分化严重，建 议弃除。

细胞复苏率低是什么原因？

细胞复苏需使用PSCeasy解冻液，可大大提高细胞的复苏效率。复苏过程中，转移细胞、吹打混匀 和重悬细胞时，吹打力度要轻柔，并尽量减少吹打次数，细胞接种后，即刻在显微镜下观察细胞团 块的大小，4 ~ 10个细胞的团块为最佳。如果吹打力度过大或次数过多，导致细胞分散成单细胞， 细胞复苏率将偏低。