代替产品2

CardioEasy®人心肌细胞

CardioEasy®人心肌细胞是一种即用型的高纯度心肌产品。该产品采用赛贝生物(Cellapy®)的心肌定向分化和纯化方法产生。同时,包括hiPSC在内的所有细胞培养分化过程采用化学成分确定的培养试剂。
       CardioEasy® 人心肌细胞主要由具备自主电生理活动的心室肌样细胞组成,同时也包含少量心房肌和窦房结样细胞。这些细胞表达常规的心肌特异性基因,包括多种收缩蛋白和离子通道,同时具备经典的心肌细胞电生理活性,能够对电生理和生物化学刺激做出心肌细胞的常规反应。以电生理和钙转导信号记录为例,赛贝心肌细胞可以作为医疗科研,新药筛选,毒理学测定和其他生理学研究的理想工具。

产品介绍

储存条件:

       活细胞储存于25℃~37℃,收到后请立即放入CO2培养箱。 冻存细胞暂存于-80℃冰箱,2周有效期;液氮储存,6个月有效期。 

产品简介:

       CardioEasy®人心肌细胞产品是一种即用型的高纯度心肌产品。该产品采用赛贝生物(Cellapy®)的高效心肌定向分化和纯化方法产生。同时,包括人多潜能干细胞(hESC/hiPSC)在内的所有细胞培养分化过程采用化学成分确定的培养试剂。CardioEasy®人心肌细胞主要由具备自主电生理活动的心室肌样细胞组成,同时也包含少量心房肌和窦房结样细胞。这些细胞表达常规的心肌特异性基因,包括多种收缩蛋白和离子通道。同时,这些细胞具备经典的心肌细胞电生理活性,能够对电生理和生物化学刺激做出心肌细胞的常规反应。以电生理和钙转导信号记录为例,这些细胞可以作为新药筛选,毒理学测定和其他生理学研究的理想工具。

产品内容:

组份代码

名称

规格

数量

CA2201106 CardioEasy®人心肌细胞-药筛级 1×106 1支

 

 

CardioEasy®心肌细胞

CardioEasy®人心肌细胞优势:

人源细胞

人心肌细胞与常用实验动物的心肌细胞相比,存在较大生理学差异。例如,人心脏生理条件下每分钟搏动60-90次,而小鼠为500-700次,大鼠为300-400次。赛贝人源心肌细胞从hiPS诱导分化而成,具备动物细胞无法比拟的优点。

纯度高

细胞纯度可达90%以上,可由搏动和表达GFP的细胞比例证实。

均一性好

可以提供大量组成稳定的心肌细胞群体,产品经过严格的质检,保证后续实验良好的重复性。

完全的心肌生理学活性

具备大多数正常人类心脏中心肌细胞的标准电生理学和生物化学特性,可以受到电兴奋刺激而产生搏动,不同心肌细胞直接还可以传导电兴奋信号。可以用于多种生物化学和电生理学检测。

培养简易

可以冻存细胞的形式运输和保存,并提供配套的接种培养基和维持培养基。仅需常规细胞培养设施即可操作应用。

稳定性强可长期培养

可以被长期体外培养。在理想条件下,可维持存活达到3个月以上,并且保持节律性的搏动,是长期药物毒性实验和生理学研究的理想模型工具。

 

细胞功能鉴定:

CardioEasy®人心肌细胞胞特异标记物荧光染色图:

CardioEasy®人心肌细胞表达主要的心肌特异性收缩蛋白Cardiac Troponin T和α-Sarcomeric-Actinin ,并且形成非常规则的肌理结构。

CardioEasy®人心肌细胞主要由心室肌样细胞组成,表达心室特异性轻链肌球蛋白MLC2v,少量其他心肌细胞表达心房特异性轻链肌球蛋白MLC2a。

 

RT-PCR 检测图:

CardioEasy®人心肌细胞纯度鉴定图:

CardioEasy®人心肌细胞NKX2.5启动子调控下特异性的表达绿色荧光蛋白(GFP)

CardioEasy®人心肌细胞电生理检测(RTCA):

接种后10-13天RTCA Cardio Instrument检测心肌收缩情况,CardioEasy®人心肌细胞具有正常人心肌细胞的搏动幅度与频率。

 

 

CardioEasy®人心肌细胞在1.1μM异丙肾上腺素(Isoprenaline)的作用下心率显著提高,0.1% DMSO处理作为阴性参照。

CardioEasy®人心肌细胞转染效率测试:

CardioEasy®人心肌细胞转染GFP质粒(Lipofectamine LTX and PLUS Reagents),48小时后观察,GFP荧光比例达到50%-60%

CardioEasy®人心肌细胞膜片钳检测:

图注:CardioEasy®人心肌细胞自发动作电位

图注CardioEasy®人心肌细胞自发Na,hERG,Ca离子通道

疑难解答:

1.CardioEasy®人心肌细胞是否可以增殖? 

    CardioEasy®人心肌细胞是终末分化的功能细胞,与人体内的心肌细胞性质相同,不能增殖扩增。  

2.CardioEasy®人心肌细胞所含的细胞亚类有哪些? 

       通过MLC2v、MLC2a和HCN4蛋白的免疫荧光检测,表明CardioEasy®人心肌细胞中含有70-80%的心室肌样细胞、20-30%的心房肌细胞和<5%的窦房结样细胞。  

3.CardioEasy®人心肌细胞是否可以用自己配置的培养基? 

      赛贝生物为 CardioEasy®人心肌细胞配套有CardioEasy®心肌接种培养基(细胞复苏)、CardioEasy®心肌维持培养基(细胞培养)和 CardioEasy®人心肌纯化试剂盒(心肌细胞富集)。CardioEasy®心肌系列培养基可维持心肌细胞在体外长期性状稳定、并保持高纯度。  

4.如何提高CardioEasy®人心肌细胞的复苏存活率? 

      CardioEasy®人心肌细胞复苏的要点是:

1)复苏过程的时间尽量短,水浴解冻的时间≤90s,转移至超净台的过程≤20s,滴加CardioEasy®人心肌接种培养基的时间≤5min;

2)由于心肌细胞极易受到物理剪切力的伤害,转移和混匀细胞时要避免剧烈吹吸;

3)准确控制滴加液体的速度,并在滴加过程中不断摇晃混匀。  

5.CardioEasy®人心肌细胞如何形成单层组织? 

       心肌细胞传导动作电位需要细胞间形成连接,按照合适的密度接种CardioEasy®人心肌细胞,可以形成均一的同步化跳动的单层心肌组织。请参考说明书并结合实际经验,摸索出合适的接种密度。  

6.接种后CardioEasy®人心肌细胞没有跳动怎么办? 

       CardioEasy®人心肌细胞一般在接种后2-3天开始跳动,不超过5天。换液、传代和在培养箱外长期放置等导致细胞外环境变化的操作,会使得心肌细胞停止跳动。如果心肌细胞长时间不跳动,请检查培养箱的温度和CO2浓度。  

7.CardioEasy®人心肌细胞可以在体外稳定维持多长时间? 

      CardioEasy®人心肌细胞能在3个月内维持基因表达的稳定性,6个月内维持特征与功能的完整性。考虑到非心肌细胞的增殖,1个月以上的研究项目需要每4-6 周用CardioEasy®心肌纯化完全培养基进行一次纯化处理。  

8.CardioEasy®心肌纯化试剂盒的作用是什么? 

       CardioEasy®心肌纯化试剂盒是赛贝生物根据心肌细胞的生理特性研发出的心肌富集试剂盒,非心肌的细胞在纯化培养基中无法存活。纯化后2周内,心肌细胞的纯度可达到90%。  

9.心肌细胞停止搏动或搏动缓慢?

1)心肌细胞在再接种操作后,需要1-3天才能恢复搏动;

2)心肌细胞在换液操作后、或在培养箱外放置过久,会减缓搏动或停止搏动,需要1-3小时才能恢复正常搏动;

3)心肌细胞长时间在CardioEasy®心肌纯化完全培养基中培养,搏动会减缓,需及时停止纯化,在CardioEasy®心肌维持培养基中恢复4 天以上,才能再次纯化。 

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